Rūpnieciskā hromatogrāfija

Radnieciskā (afīnā) hromatogrāfija balstās uz radniecīgu olbaltumvielu mijiedarbību ar ligandiem, kas ir piestiprināti (imobilizēti) pie cieta nesēja. Šāda tipa hromatogrāfija ir ļoti iedarbīga metode, kas tiek izmantota biomolekulu atdalīšanai. Tā ir metālu helātu hromatogrāfija, kas paredzēta „His-tag” (olbaltumvielu attīrīšanas matrica) saturošu savienojumu atdalīšanai. Atdalīšana tiek veikta, izmantojot afīnus ligandus uz sorbenta matricas. Par ligandiem var būt substrāts vai koferments. Pie ligandiem piesaistās tikai olbaltumviela. Šī mijiedarbība ir specifiska. Visas pārējās olbaltumvielas nokļūst eluātā. Radnieciskajai (afīnajai) hromatogrāfijai ir raksturīgs liels specifiskums, kas izdalīto olbaltumvielu ļauj attīrīt tūkstošiem reižu. Olbaltumvielas A ligandu saturošie sorbenti ir paredzēti monoklonālo antivielu attīrīšanai.

Olbaltumvielu molekulām ir sarežģīta struktūra, tām var būt pozitīvs vai negatīvs lādiņš. Olbaltumvielu attīrīšanai visbiežāk izmantotā metode – jonu apmaiņas hromatogrāfija. Šīs metodes mērķis ir atdalīt molekulas pēc to virsmas lādiņa un funkcionālās grupas. Jonu apmaiņas hromatogrāfija ir balstīta uz apmaiņas reakciju, kas notiek starp analizētā šķīduma jomiem un sorbenta kustīgajiem joniem, laižot šķīdumu caur kolonnu, kas piepildīta ar katjonītu vai anjonītu. Izvēloties piemērotus hromatogrāfijas apstākļus (piem., sāls koncentrācija, bufersistēma un pH), olbaltumvielas var atdalīt no piemaisījumiem. Praksē visbiežāk saistošās molekulas tiek selektīvi izskalotas vairākos soļos vai pastāvīgi palielinot sāls koncentrāciju. Piemaisījumi var tikt saistīti ar sorbentu vai ar membrānu filtru. Jonu apmaiņas hromatogrāfijai piedāvātie „Merck” sorbenti: Fractogel®, Eshmuno®.

Reverso fāžu hromatogrāfijas metodes priekšrocība ir tā, ka ar to var ātri un efektīvi iegūt augstas tīrības produktus. Svarīgu lomu veic preparatīvās hromatogrāfijas kolonnas, kad eksperimentiem un ražošanai jāattīra dārgi savienojumi. Ja normālās un reverso fāžu hromatogrāfijas paplašinātajā posmā ir nepieciešams silikagels, rekomendējam izmantot neregulārās formas LiChroprep® vai sfēriskās formas PharmPrep® – ļoti universālus materiālus, kas nodrošina ātru, efektīvu un atkārtojamu atdalīšanu. 

Reverso fāžu hromatogrāfijā ļoti svarīga ir izmantotā sorbenta kvalitāte. Viens no svarīgākajiem faktoriem ir selektivitāte, kas ir izšķiroša hromatogrāfiskās atdalīšanas kvalitātes un atkārtojamības noteikšanā. Ar „Merck” neorganiskajiem sorbentiem jūs iegūsiet lieliskus atkārtojamus rezultātus, bet šaurais daļiņu sadalījums pēc izmēra nodrošinās nevainojamu izšķirtspēju. Tas nodrošina augstākā līmeņa ticamību hromatogrāfiskajai atdalīšanai un attīrīšanai, ko veic laboratorijā, mazas ražošanas eksperimentālajā laboratorijā un ražošanā.

Olbaltumvielu attīrīšana un gala tīrīšana ir atkarīga no izvēlētajām hromatogrāfijas metodēm, kas darbojas kopā, izolējot vajadzīgo olbaltumvielu un noņemot visus atlikušos piemaisījumus. Šī metode ir balstīta uz to, ka atšķirīgas molmasas vielas atšķirīgi sadalās starp kustīgajām un nekustīgajām hromatogrāfijas kolonnas fāzēm. 

Hidrofobās mijiedarbības hromatogrāfija ir lieliska izvēle olbaltumvielu attīrīšanai. Šī metode ir balstīta uz hidrofobo ligandu un olbaltumvielu molekulu hidrofobo grupu mijiedarbību. Lielas koncentrācijas sāls šķīdums palīdz labāk atdalīt vajadzīgo olbaltumvielu. 

Molekulāro sietu hromatogrāfija (gelfiltrācija) ir paredzēta olbaltumvielu gala tīrīšanai. Buferšķīdumam netiek izvirzītas augstas prasības. Natīvās olbaltumvielas, rekombinantās olbaltumvielas, vīrusi un bioloģiskas izcelsmes plazma var tikt viegli atdalīta, izmantojot molekulāro sietu hromatogrāfijas kolonnas.

Veiksmīgai molekulu atdalīšanai ļoti svarīga ir pareiza hromatogrāfijas kolonnu izvēle. Otrs posms ir sorbenta uzpilde kolonnā – uzpildes kvalitātes pārbaude un validācija. Mūsdienu modernais risinājums ir uzpildītās kolonnas Chromabolt®.  Tās var būt standarta vai individuāli izgatavotas kolonnas. Uzpildītās hromatogrāfijas kolonnas ir piemērotas lietošanai laboratorijā, maza apjoma eksperimentālajā un pastāvīgajā ražošanā. Izmantojot uzpildītās hromatogrāfijas kolonnas, jūs varēsiet precīzi pārvaldīt savu darba laiku, vairs nevajadzēs tērēt laiku hromatogrāfijas kolonnu uzpildīšanai, tāpēc vairāk uzmanības varēsiet veltīt produkta ražošanai. Iespējama dažādu hromatogrāfijas kolonnu izmēru un sorbentu kombināciju izvēle.

Katrā ražošanas solī ir nepieciešama procesu stabilitātes un tīrības nodrošināšana. Tieši tāpēc mēs piedāvājam tik plaši ķīmisko vielu sortimentu – no sāļiem līdz koncentrētiem šķīdumiem. Preparāti ir gatavi lietošanai un iepakoti vienreizlietojamos iepakojumos vai stingros plastmasas konteineros. „Merck” EMPROVE® bio un EMPROVE® exp produkti tiek piedāvāti ar detalizētu kvalitātes nodrošināšanas dokumentāciju. Ar EMPROVE® produktiem Jūsu darbs noritēs ātrāk un ekonomiskāk. 

Gandrīz katrā biofarmācijas ražošanas procesa posmā tiek izmantots buferis, tāpēc procesa veiksmīgu norisi ietekmē izmantotā bufera kvalitāte. „Merck” piedāvā augstas kvalitātes bufervielas, kas piemērotas visām biežāk lietotajām bufersistēmām, tādas kā fosfāti, acetāti vai organiskie buferi TRIS, HEPES vai MES.

Izstrādājot ražošanas procesus, cenšas samazināt mikroorganismu piesārņojumu un endotoksīnu koncentrāciju. Turklāt nav zināma daudzu buferu fermentatīvā aktivitāte (DNāzes, RNāzes vai proteāzes), bet tas ir īpaši svarīgi biohromatogrāfijai. Šim nolūkam var izmantot kvalifikācijas komplektus ar piemēriem no trim partijām. 

Ražošanas iekārtu tīrīšanai biofarmācijā tiek izlietoti lieli daudzumi tīrīšanas līdzekļu (CIP). Dažiem uzņēmumiem tīrīšanas produkti tiek ražoti pēc pieprasījuma. Uzņēmums „Merck” ir izstrādājis augstas kvalitātes produktus biofarmācijas iekārtu tīrīšanai un hromatogrāfijas sorbentu glabāšanai. Tie ir Fractogel® un ProSep® sorbenti, kā arī Pellicon® kasetes. Visi produkti atbilst augstākajā tīrības un uzticamības prasībām un efektīvi novērš piesārņojumu. Visi produkti atbilst GMP prasībām.