Vispārīgā mikrobioloģija

Visu sterilo produktu, kas izgatavoti saskaņā ar LRP (angl. GMP - good manufacturing practice), sterilitāte pastāvīgi jātestē. Tomēr ne visi sterilitātes testēšanas veidi ir līdzvērtīgi. Rezultātu kvalitāte, testēšanas ērtums un piemērotība var ļoti atšķirties, ietekmējot rezultātu ticamību. Iegūti kļūdaini negatīvi rezultāti var būt saistīti ar piesārņotu produktu izlaišanu apritē un radīt nopietnas sekas gan pacientiem, gan ražotājiem. No otras puses, krusteniskais piesārņojums un kļūdaini pozitīvi rezultāti nozīmētu ilgus un dārgus pētījumus, kā arī produkta aizturēšanu vai noraidīšanu. Merck piedāvā risinājumu sterilitātes noteikšanai: slēgtu membrānu filtrēšanas sistēmu un plašu barotņu sortimentu, kā arī skalošanas buferus, kas piemēroti visiem sterilitātes noteikšanas pētījumiem.

Mikrobioloģiskā piesārņojuma noteikšana (angl. Bioburden testing) paredzēta nesterilizētās izejvielās vai gala produktā atrodamu dzīvotspējīgu aerobu mikroorganismu konstatēšanai. Bioburden tests tiek veikts divās kārtās. Pirmajā - kvantitatīvajā (mikroorganismu skaitīšanas) kārtā - tiek noteikts kopējais aerobo mikroorganismu, tāpat arī kopējais raugu un pelējumu daudzums. Otrajā - kvalitatīvajā (mikroorganismu atrašanas) kārtā - tiek noteikta konkrētu mikroorganismu esamība vai neesamība. Merck piedāvā iekārtas un piederumus, piemēram, membrānu filtrēšanas moduļus, piltuvītes, vakuumsūkņus, membrānas filtrus, filtru dispenserus, barotnes, reaģentus u.c.

Merck jau daudzus gadus ražo augstākās kvalitātes barotnes, paredzētas farmācijas, kosmētikas, pārtikas un dzērienu rūpniecībai. Šīm rūpniecības nozarēm paredzētās barotnes ir: dehidratētas granulētas, lietošanai gatavas šķidras, lietošanai gatavas cietas (agarizētas). Visi produkti atbilst visaugstākajām kvalitātes prasībām, tiem ir kvalitātes sertifikāti un tie ir droši lietotājiem.

PyroDetect ir jaunākā pirogēnu noteikšanas sistēma, kas balstās monocītu aktivizēšanas izpētē (MAT), kura aprakstīta Eiropas farmakopejā (EP nodaļa 2.6.30) 2010. gadā. Izmantojot iedzimto organisma imūnaizsardzības reakciju, PyroDetect sistēma imitē cilvēka temperatūras paaugstināšanās reakciju labāk par jebkura dzīvnieka pirogēnu testu. Paraugā esošie pirogēni aktivizē saldētās cilvēka asinīs esošos monocītus, tā rezultātā veidojas citokīni, kurus nosaka ar ELISA paņēmienu, izmantojot specifiskus antiviela un fermentu kolorimetriskās reakcijas. Monocītu aktivizēšanas tests balstīts saldētu asiņu un interleikīna-1β reakcijā. Trīs galvenās kārtas testā ar PyroDetect sistēmu: saldētu (vai svaigu) asiņu inkubēšana, IL-1β ELISA tests un datu analīze.

ACC ir viens no lielākajiem ražotājiem pasaulē, kas tirgum piegādā produktus gramnegatīvu baktēriju endotoksīnu un (1→3)-ß-D-glukānu noteikšanai un kvantitatīvai skaitīšanai. Šos produktus izmanto pasaulē vadošie farmācijas un medicīnas ierīču ražošanas uzņēmumi, lai garantētu savu ražoto parenterālo medikamentu, bioloģisko produktu un medicīnas ierīču drošumu. Pielietošanas jomas: farmaceitisko injekciju preparātu testēšana, izejvielu un procesa kontrole, bioloģisko preparātu kontrole, dialīzes ūdens testēšana u.c.

Ar Limulus Amebocyte Lysate (LAL) testiem var noteikt un kvantitatīvi novērtēt gramnegatīvo baktēriju ārējās membrānas izdalītos endotoksīnus. Galvenais LAL reaģentu komponents, kas tiek izmantots šajos testos, ir olbaltumviela, kura piedalās endotoksīnu ierosinātās asins recēšanas mehānismā un tiek iegūta no Amerikas zobenastes (Limulus polyphemus) amebocītu lizāta ekstrakta. LAL testi aprakstīti ASV farmakopejā (nodaļa) baktēriju endotoksīnu noteikšanas nodaļā, Eiropas farmakopejā (nodaļa 2.6.14.) un Japānas farmakopejā (Vispārējie testi, Nr. 4.01.).

Hromgēnā (krāsu) metode. LAL reaģentam ir attiecīgs sintētisks substrāts, kuram noreaģējot ar endotoksīnu aktivizēto olbaltumvielu, parādās dzeltena krāsa. Tests tiek nolasīts ar mikroplašu lasītāju pie 405 nm viļņa garuma. Testu var veikt ar galīgā rezultāta vai kinētisko metodi. Maksimālā jutība 0,001 EV/ml.

Turbidimetriskā (duļķainības) metode. Kinētiska metode, balstīta faktā, ka, endotoksīniem ietekmējot lizātu, rodas duļķainība. Duļķainības optiskais blīvums tiek mērīts ar mikroplašu lasītāju vai mēģeņu lasītāju inkubācijas režīmā. Testa jutība – 0,001 EV/ml.

Gel-clot (gela gabala) metode. LAL reaģents endotoksīnu ietekmē veido gelus. Tā ir pati vienkāršākā metode. Rezultāti tiek novērtēti, mēģeni apgriežot otrādi. Maksimālā jutība 0,03 EV/ml. Lētākā metode – nav nepieciešams optiskais lasītājs. Piemērota necaurspīdīgiem un krāsainiem paraugiem, suspensijām.