HPLC laikā maisījuma komponenti tiek pārnesti stacionārajā fāzē ar kustīgās fāzes plūsmu, bet atdalīšana balstās parauga komponentu migrācijas ātrumu starpībā. Tāpēc analizēto vielu veids nosaka ne tikai metodi, bet arī HPLC sistēmas izvēli
Galvenā analīta īpašības:
MOLEKULMASA ietekmē stacionārās fāzes pāru izmēru
ŠĶĪDĪBA nosaka HPLC režīmu, stacionārās fāzes ķīmiju un eluentu.
KONCENTRĀCIJA UN MATRICA nosaka noteikšanas parametrus un kolonnas izmērus.
Analītu šķīdība nosaka HPLC režīmu. Elutropās sērijas raksturo šķīdinātāja stiprumu biežāk lietotajiem hromatogrāfijas režīmiem – normālo un reverso fāžu hromatogrāfijai.